آزمایش با روش ایمونوفلورسانس مستقیم

آزمایش با روش ایمونوفلورسانس یا سیتومتری برای برچسب گذاری یک آنتی ژن هدف خاص با حامل فلورسنت استفاده می شود. در این آزمایش فلوروفور یک ترکیب شیمیایی فلورسنت است که می تواند در صورت برانگیختن نور دوباره تابش نور کند. وقتی فلوروفور به آنتی ژن مورد نظر متصل می شود، اجازه می دهد تا مولکول هدف در نمونه شناسایی شود.

 برای توضیح بیشتر، هنگامی که یک آنتی ژن به آنتی بادی خاصی متصل می شود، می تواند با فلوروفور ترکیب شود. بنابراین، وجود آنتی ژن مورد نظر در نمونه به راحتی قابل مشاهده است. در این مقاله به بررسی آزمایش با روش ایمونوفلورسانس مستقیم می پردازیم.

تشخیص در آزمایش با روش ایمونوفلورسانس مستقیم

شواهد مربوط به بافت، آنتی بادی و ساختارهای بیماری زا با برچسب ایمنی جدید و دقیق است. ایمونوفلورسانس به برچسب ایمنی آنتی بادی های فلورسنت که برای تابش در زیر نور UV آماده شده اند، اشاره دارد.

در تشخیص در آزمایش با روش ایمونوفلورسانس مستقیم بستر مستقیما با استفاده از آنتی بادی های فلورسنت، بدون آنتی بادی اولیه یا آنتی ژن مصنوعی مورد بررسی قرار می گیرد.

تفاوت بین آزمایش با روش ایمونوفلورسانس مستقیم و غیر مستقیم چیست؟

بسته به ترکیب فلوروفور با آنتی بادی های مورد استفاده، ایمونوفلورسانس می تواند مستقیم یا غیر مستقیم باشد. در ایمونوفلورسانس مستقیم، فلوروفور با آنتی بادی اولیه، تنها آنتی بادی که از این تکنیک استفاده می کند، ترکیب می شود. در مقابل، در ایمونوفلورسانس غیر مستقیم، فلوروفور با آنتی بادی ثانویه، یکی از دو نوع آنتی بادی که این تکنیک در آن گنجانده شده است، ترکیب می شود. از این رو، تفاوت اصلی بین آزمایش با روش  ایمونوفلورسانس مستقیم و غیر مستقیم نوع آنتی بادی است که با فلوروفور ترکیب می شود.

شباهت های ایمونوفلورسانس مستقیم و غیر مستقیم چیست؟

• آن ها دو نوع تکنیک ایمونوفلورسانس هستند.
• آنتی بادی های اولیه و فلوروفورها در هر دو روش دخیل هستند.
• همچنین، واکنش آنتی ژن-آنتی بادی به هر دو صورت رخ می دهد.
• علاوه بر این، ایمونوفلورسانس مستقیم و غیر مستقیم از میکروسکوپ فلورسانس برای تشخیص آنتی ژن استفاده می کند.

تشخیص مستقیم ایمونوفلورسانس چیست؟

آنتی ژن های اختصاصی تومور را می توان مستقیما با استفاده از آزمایش با روش ایمونوفلورسانس در بافت های تومور تشخیص داد. این امر امکان یافتن منبع متاستازها در بدن را ممکن می سازد.

تشخیص ایمونوفلورسانس مستقیم یک روش تشخیصی مبتنی بر دانش ایمونولوژی، ایمونوهیستوشیمی و ایمونوهیستوشیمی است. در اینجا تمرکز بر توانایی آنتی بادی ها برای اتصال به نقاط خاص در بافت ها یا آنتی ژن های سرم خون است. این مکان ها اپیتوپ هستند.

در تشخیص بیوشیمیایی، آنتی بادی ها یا آنتی بادی های مصنوعی وجود دارند که باعث می شود پیوندهای آنتی بادی و آنتی ژن با فلورسانس یا رادیواکتیویته مشخص شوند. ترکیبات آنتی بادی مصنوعی از یک سو به اپی توپ ها متصل می شوند و از طرف دیگر در صورت ایمونوفلورسانس دارای علامت فلورسنت هستند. این یک جایگزین برای استفاده از برچسب های رادیواکتیو است.

 مزیت تشخیص در آزمایش با روش ایمونوفلورسانس مستقیم در مقایسه با تشخیص غیرمستقیم این است که آنتی بادی که به حلقه آنتی ژن ماده مورد بررسی متصل می شود، همچنین نشان دهنده آنتی بادی فلزسنت کونژوگه شده با برچسب فلورسنت است. آنتی بادی های اضافی برای تشخیص مستقیم ضروری نیست.

فلوروسن که در زیر نور ماوراء بنفش می درخشد و ایزوتیوسیانات فلورسئین (FITC) به عنوان رنگ برای ساخت آنتی بادی مصنوعی در ایمونوفلورسانس استفاده می شود. کمی پیچیده به نظر می رسد؛ اما تشخیص ایمونوفلورسانس مستقیم یک روش تشخیص آزمایشگاهی پزشکی استاندارد برای انواع سوالات پزشکی است. 

عملکرد، تأثیر و اهداف

تشخیص ایمونوفلورسانس مستقیم برای سنجش بافت ها برای لکه گیری ساختارهای خاص در بافت ها در دسترس است. اما برای تک سلولی ها نیز موجود می باشد. در اینجا فلوسایتومتری نقش اصلی را ایفا می کند. در نهایت، سنجش فاز جامد و مایع وجود دارد. سنجش ایمونوفلورسانس بافتی در سرطان شناسی، یعنی درمان دارویی بیماری های سرطانی، از اهمیت ویژه ای برخوردار است.

آنتی ژن های اختصاصی تومور را می توان مستقیما با استفاده از ایمونوفلورسانس در بافت های تومور تشخیص داد. این بررسی ها بر نمونه های بافتی گرفته شده از تومورها اغلب برای یافتن منبع متاستازها در بدن یا به منظور قضاوت در مورد خوش خیم یا بدخیم بودن تومور مهم است. غربالگری تک تک سلول ها با استفاده از تشخیص ایمونوفلورسانس مستقیم برای یافتن آنتی ژن های ویروس، آنتی ژن های باکتریایی و دیگر اپی توپ ها استفاده می شود.

به عنوان مثال، می توانید بفهمید که آیا سلول ها به ویروس آلوده شده اند و سلول ها در چه مرحله ای از چرخه عفونت هستند. نام FACS (= طبقه بندی سلول های فعال فلورسنت) یک روش فلوسیتومتری بسیار کارآمد است که در آن سلول های دارای علامت فلورسنت بسته به نوع رنگ در لوله های آزمایش مختلف توزیع می شوند. این روش در ایمونولوژی، هماتولوژی و بیماری های عفونی مهم است.

سنجش ایمونوفلورسانس امکان تشخیص مستقیم سموم محیطی، ارگانیسم های اصلاح شده ژنتیکی و برخی افزودنی ها در غذا را فراهم می کند. در این مجموعه آزمایشی، همیشه یک فاز جامد و مایع وجود دارد. بسیاری از عوامل بیماری زا نیز قابل تشخیص هستند، از جمله HIV که باعث ایدز می شود. با این حال، هنگام تشخیص بیماری های عفونی و خود ایمنی، اغلب بحث تشخیص آنتی بادی ها است نه آنتی ژن ها. این ها مولکول های دفاعی هستند که توسط سیستم ایمنی بدن تشکیل شده اند. با توجه به تعریفی که در اینجا ارائه شده است، این اثبات ها مستقیم نیستند، زیرا آنتی بادی های فلورسنت مستقیما به آنتی ژن های بدن متصل نمی شوند، بلکه به آنتی ژن های درجه آزمایش متصل می گردند.

این آنتی ژن ها در محیط تجربی به نوبه خود به آنتی بادی های بدن متصل می شوند. آزمایش با روش تشخیص ایمونوفلورسانس مستقیم عفونت های شایع، مانند ویروس HIV و کلامیدیا، تنها در آزمایش های تشخیص و تأیید ویژه استفاده می شود.

 آزمایشات بسیاری از بیماری ها وجود دارد. در بیشتر موارد، تشخیص غیر مستقیم آنتی بادی ها برای بیماری های عفونی مناسب تر است؛ زیرا سیستم ایمنی بدن توانایی به یاد آوردن عفونت های گذشته را دارد. در موارد دیگر، تشخیص مستقیم آنتی ژن ها و تشخیص غیر مستقیم آنتی بادی ها مکمل یکدیگر هستند. مورد دوم نشان می دهد که عفونت قبلا رخ داده است؛ در حالی که مورد اول اطلاعات دقیق تری در مورد وضعیت فعلی فعالیت بیماری زا ارائه می دهد.

خطرات و عوارض جانبی

با تشخیص آزمایش با روش ایمونوفلورسانس مستقیم، مانند تمام شواهد پزشکی، دو خطر وجود دارد: خطر نتیجه مثبت کاذب و خطر نتیجه منفی کاذب. نتایج مثبت کاذب باعث ناراحتی روانی و استرس زیاد برای بیمار می شود.

بنابراین، روش های آزمایش اضافی به نتایج مثبت اضافه می شود؛ به ویژه اگر تشخیص منجر به تغییرات شدید زندگی شود. خطر بدست آوردن نتیجه منفی کاذب این است که بیمار به موقع از خطر سلامتی خود و شاید حتی سلامت عمومی اطلاع ندارد. همراه با سایر روش های تشخیص مستقیم و غیر مستقیم بیماری ها و آسیب شناسی ها، این امر باعث افزایش دقت تشخیص می شود.

تشخیص مستقیم بستگی به ترکیب آنتی بادی دارد که از یک سو به اپی توپ های آنتی ژن متصل می شود و از طرف دیگر باعث فلورسانس می گرد. بنابراین، این محصول فقط در یک نوع روش آزمایش مورد استفاده قرار می گیرد و برای سایر انواع روش های آزمایش استفاده نمی شود. این تفاوت رویه ای مهم برای شواهد غیرمستقیم است؛ زیرا آنتی بادی های فلورسنت قبل از آنتی بادی های اولیه متصل به اپی توپ هستند. بنابراین، مزدوج آنتی بادی برای آزمایش های مختلف مناسب است. این تفاوت رویه ای با تفاوت پزشکی بین تشخیص غیر مستقیم آنتی بادی ها و تشخیص مستقیم آنتی ژن ها متفاوت است.